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点击次数:3259 发布时间:2017-10-10

预制胶—让您的WB省时省力更省心

Western blotting是一个步骤繁多的实验,每一步都会对zui后的结果产生影响,电泳过程是其中关键重要的一步。好的电泳能让目的条带整齐,结果图让人眼前一亮。要做好电泳也并非易事,凝胶质量在其中扮演着重要作用
电泳的支持介质为聚丙烯酰胺凝胶,该凝胶的聚合由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体在自由基的催化下完成。常用的催化聚合方法有两种,分别为化学聚合法和光聚合法,实验室配制凝胶通常为化学聚合。在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,形成三维网状结构。

聚丙烯酰胺凝胶有两种形式:SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)。
     SDS-PAGE和Native-PAGE的区别在于在样品和凝胶中是否加入还原剂和SDS。在SDS-PAGE中,蛋白的迁移率只取决于分子量的大小而不受蛋白质原来的电荷和形状的影响。Native-PAGE依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开,蛋白质能够保持完整状态。 

根据凝胶孔径可以分为单一浓度凝胶和梯度凝胶。梯度凝胶从凝胶顶部到底部丙烯酰胺的浓度呈梯度变化,高浓度的丙烯酰胺溶液首先加入到玻璃平板的底部,而后溶液浓度呈梯度下降,因此在凝胶的顶部孔径较大,而在凝胶的底部孔径较小。梯度凝胶电泳也通常加入SDS,并有浓缩胶,电泳过程与SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳基本类似。

使用梯度凝胶的优点有以下几点:

      1.梯度凝胶的分离范围更宽,可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。单一凝胶电泳对于分子量超过其分离范围的蛋白质,过大或过小,都不能分离。而梯度凝胶孔径范围比单一凝胶大,分子量较大的蛋白质可以在凝胶顶部大孔径部分得到分离,而分子量较小的蛋白质可以在凝胶底部小孔径部分得到分离,所以分子量较大和较小的蛋白质可以同时得到分离。

      2. 梯度凝胶可以分辨分子量相差较小,在单一浓度凝胶中不能分辨的蛋白质。蛋白质在梯度凝胶中迁移,经过的孔径越来越小,直到凝胶的孔径不能通透,这样电泳过程中蛋白质就被浓缩,集中在一个很窄的区带中。而分子量略小的蛋白质可以迁移得更靠前一些,被集中在略前面的区带中。由于梯度凝胶孔径逐步变小,在蛋白质不能通透的孔径附近对蛋白有浓缩作用,所以电泳后形成很窄的区带,可以分辨出分子量相差较小的蛋白质。对于太稀的样品,在电泳过程中可以将样品分几次加样,大小不同的蛋白质分子zui终都会滞留在其相应的凝胶孔径中而得到分离。

      3. 可以直接测定天然状态蛋白质的分子量而不需要解离为亚基,这一方法可以与SDS-PAGE测定分子量的方法互为补充。
实验室在自行配制WB所需凝胶时需准备很多试剂和材料,包括:

ddH2O,30%丙烯酰胺混合液(29:1,丙烯酰胺:甲叉丙烯酰胺),1.5M Tris(pH 8.8),1.0M Tris(pH 6.8),10% SDS,10%过硫酸铵(APS),N,N,N',N'四甲基二乙胺(TEMED)等。
其中丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体具有神经毒性,作用具有累积性; APS也有一定毒性,对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性;吸入后引起鼻炎、喉炎、气短和咳嗽等。眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤。口服引起腹痛、恶心和呕吐,长期皮肤接触可引起变应性皮炎。TEMED对粘膜和上呼吸道组织及皮肤有很大的破坏作用,具有强神经毒性。

不想再接触这些有毒试剂?没关系~爱必信预制胶来帮您!

爱必信预制胶与传统的实验室自行配制凝胶相比,具有以下优点:

      1. 即开即用,不用再自行配制配胶所需溶液、灌胶、等胶凝固,节省您的宝贵的时间和精力;

      2. 不用再接触丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺,过硫酸铵(APS)以及TEMED等几种具有积累性神经毒性的试剂;

      3. 大规模生产,胶与胶之间重复性好,质量稳定,不像手工灌胶那样结果差异大。

产品特点

      ★ 高性能:分离能力强,分辨率高;

      ★ 超长保质期:2-8℃可以稳定保存一年;

      ★ 兼容性广:与大多数市售mini电泳槽兼容,包括:Bio-Rad mini-PROTEAN (Ⅱ/3/Tetra system),Hoefer Mighty Small (SE 250 / SE 260/ SE 280),Life Technology Novex Mini-Cell (请与我们申请特制挡板配套使用)。

     ★ 快速:仅需40~50min即可完成电泳;

     ★ 重复性高:不同批次预制胶的一致性好; 

     ★ 物美价廉:相对目前市场其他品牌价格低,节约实验成本;
我们提供的预制胶系统有8%,10%,12%,15%,4%-15%,4-20%,8-20%多种规格,可供您的选择更多,为您的实验贴心服务。
产品信息:

  货号  凝胶浓度/孔数  分离蛋白分子量范围
    abs9301  PAGE Gel  10%,10 wells,  20kDa-200kDa
    abs9308  PAGE Gel  10%,15 wells,  20kDa-200kDa
    abs9302   PAGE Gel  12%,10 wells,  15kDa-200kDa
    abs9309  PAGE Gel  12%,15 wells  15kDa-200kDa
    abs9303  PAGE Gel  15% ,10 wells,  10kDa-200kDa
    abs9310  PAGE Gel  15% ,15 wells,  10kDa-200kDa
    abs9304  PAGE Gel  4-15%, 10 wells  10kDa-200kDa
    abs9311  PAGE Gel  4-15%, 15 wells,  10kDa-200kDa
    abs9305   PAGE Gel  4-20%, 10 wells,  10kDa-200kDa
    abs9312  PAGE Gel  4-20%, 15 wells,  10kDa-200kDa
    abs9300  PAGE Gel   8%, 10 wells,  40kDa-200kDa
    abs9307    PAGE Gel  8%, 15 wells,  40kDa-200kDa
    abs9306  PAGE Gel  8-20%, 10 wells,  10kDa-200kDa
    abs9313  PAGE Gel  8-20%, 15 wells,  10kDa-200kDa

 

爱必信特色产品线:

生化试剂(60万种)、抗体(10万种)、细胞因子、二抗、ECL发光液、蛋白marker、激动剂、抑制剂、凋亡试剂盒、BSA、动植物提取物、蛋白酶K、组化笔...

 


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